Комплексное исследование: коэкспрессия p16 и Ki67 (CINtec PLUS) и жидкостная цитология BD SurePath (ПАП – тест) в Соликамск

ОПИСАНИЕ

В настоящее время ведущей в развитии РШМ общепризнана вирусная этиология, согласно которой вирус папилломы человека (ВПЧ) обладает способностью вызывать предопухолевую и опухолевую трансформацию клеток эпителия шейки матки.

Особенно опасны типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68 ВПЧ - это вирусы высокого канцерогенного риска, а также тип 66 - потенциально высокого риска. Если какой-то из вирусов папилломы человека высокого канцерогенного риска находится в организме женщины долгое время (более 2 лет), то вероятность развития РШМ многократно возрастает.

В 70% случаев рака шейки матки при исследовании обнаруживаются 16-й и 18-й типы ВПЧ, в 20% случаев - 31, 33, 45, 52, 58-й типы.

Большинство случаев инфицирования (80-90%) заканчивается спонтанной элиминацией ВПЧ, в то время как длительное персистирование ВПЧ негативно влияет на клетки эпителия шейки матки, способствует их перерождению в злокачественные клетки. Последовательно, на протяжении 10-15 лет, развиваются цервикальные интраэпителиальные неоплазии (CIN), рак нулевой стадии (преинвазивный рак) и инвазивный РШМ.

Однако результаты этого анализа могут быть как ложноотрицательными, так и ложноположительными. По некоторым данным, чувствительность Пап-теста для выявления клинически значимых изменений в эпителии шейки матки (умеренной/тяжелой дисплазии – CIN2+) составляет от 47 до 62%, а специфичность – от 60 до 95%, соответственно.

Достаточно перспективным тестом диагностики дисплазии и рака шейки матки может быть иммуноцитохимическое определение повышенной экспрессии на поверхности эпителиальных клеток белка p16INK4a.

Иммуноцитохимический метод – это метод молекулярной иммунологической диагностики, позволяющий идентифицировать клеточные и тканевые молекулы-антигены в результате их связывания с антителами и формирования комплекса "антиген-антитело". Данный метод позволяет проводить иммунологический анализ цитологического материала в условиях сохранения морфологии клеток.

Белок p16 (p16INK4a) регулирует клеточный цикл эпителиальных клеток различных органов (включая шейку матки) и способствует физиологическому старению этих клеток. Повышение уровня данного белка ассоциировано с нарушением деления клеток: его концентрация повышается, чтобы затормозить активную пролиферацию клеток дисплазии. Также повышение p16 — косвенный признак внедрения онкогенных типов ВПЧ в генетический материал клеток эпителия шейки матки

Белок p16INK4a принадлежит к группе ингибиторов циклинзависимой киназы Cdk4/6 и кодируется геном-супрессором опухоли INK 4a (синонимы: MTS 1, CDKN2, INK4a/ARF).

В норме белок p16INK4a блокирует вызываемую фактором роста стимуляцию деления клетки за счет угнетения циклинзависимой киназы, что приводит к нарушению фосфорилирования белка ретинобластомы (БРБ). В этих условиях БРБ связывается с фактором транскрипции Е2F, блокирует его митотическую активность и останавливает деление клетки. Однако, при ВПЧ инфекции, встроенная в геном хозяина ДНК вируса, начинает синтезировать два онкогена, Е6 и Е7. Онкоген Е7 связывается с белком ретинобластомы, препятствуя ингибированию E2F. Это приводит к неконтролируемому делению клетки и повышенному синтезу белка p16INK4a, что может быть зафиксировано с помощью иммуноцитохимической реакции.

Выявление экспрессии белка р16INK4a иммуноцитохимическим методом в дополнение к рутинному методу жидкостной цитологии и окраски мазков по Папаниколау позволяет повысить чувствительность теста, выявлять персистирующую папиллома-вирусную инфекцию до появления морфологических изменений, с наибольшей точностью обнаружить риск развития рака шейки матки, своевременно поставить диагноз и назначить требуемое лечение.

Дополнительную информацию при скрининге может дать проведение иммуноцитохимического исследования с определением коэкпрессии белков p16 и Ki-67, которое рекомендовано как подтверждающий метод выявленных при скрининге изменений и определения степени выраженности дисплазии, в том числе у женщин, инфицированных онкогенными типами ВПЧ (16/18) до направления на кольпоскопию и проведения биопсийного исследования.

Ki-67 - это маркёр пролиферативной активности опухоли, который можно обнаружить в клетке, когда она делится, но в фазе покоя клеточного цикла он не определяется. Эта особенность Ki-67-маркера служит полезным индикатором прогноза поведения злокачественной опухоли. Он показывает, насколько агрессивен рост опухоли. Критерий оценки агрессивности:

• до 15% - низкая «агрессивность», назначение гормонотерапии;
• более 30% - высокая «агрессивность» опухоли, показано химиотерапевтическое лечение.

Практически всегда коэкспрессия p16 и Ki-67 свидетельствует о тяжёлой дисплазии или онкологическом процессе: при CIN II выявляется в 80–100% случаев, при CIN III - практически в 100% случаев.

ПОДГОТОВКА К ИССЛЕДОВАНИЮ

За 48 часов до исследования исключить половой контакт, не проводить спринцевание, внутривагинальную терапию (свечи, тампоны), не использовать антисептические средства (в том числе мирамистин). За 3–4 часа до исследования следует воздержаться от мочеиспускания. В день исследования запрещается проводить туалет половых органов.

Если проводилась расширенная кольпоскопия с обработкой 3—5%-ми растворами уксусной кислоты или люголя, брать биоматериал для исследования можно не ранее чем через 48 часов.

 

Важно: не проводится взятие материала во время менструации, в период лечения генитальных инфекций.

 

Материал для исследования: соскоб шейки матки.

ПОКАЗАНИЯ

•  Скрининг и диагностика предраковых заболеваний шейки матки.
• Скрининг и диагностика рака шейки матки, цервикальной интраэпителиальной неоплазии, наблюдение женщин после лечения этих заболеваний.

 

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

 Интерпретация результатов содержит аналитическую информацию для лечащего врача. Лабораторные данные входят в комплекс всестороннего обследования пациента, проводимого врачом и не могут быть использованы для самодиагностики и самолечения.

 

Положительная иммуноцитохимическая реакция (выявлена экспрессия белка p16 и Ki67):

• Обнаружены клетки с коэкспрессией р16 и Ki-67. Результат указывает на нарушение регуляции клеточного цикла и свидетельствует о наличии дисплазии (LSIL, НSIL) и плоскоклеточного рака (ороговевающего и неороговевающего).

 

Отрицательная иммуноцитохимическая реакция (не выявлена экспрессия белка p16 и Ki67):

• Двойная коэкспрессия белков р16 и Ki-67 не обнаружена. Результат указывает на отсутствие плоскоклеточного интраэпителиального поражения.