ПротоСкрин (выявление ДНК простейших в кале методом ПЦР: Lamblia (Giardia) intestinalis, Blastocystis hominis, Dientamoeba fragilis, Isospora belli, Cryptosporidium parvum, Entamoeba histolytica) в Куеда

ОПИСАНИЕ

Данное скрининговое исследование кала предназначено для выявления наиболее часто встречающихся у человека протозойных инвазий (лямблиоза, амебиаза, бластоцистной инвазии, криптоспоридиоза, изоспороза) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Перечисленные инфекции имеют общие пути заражения и могут иметь сходные клинические проявления (нарушения функций желудочно-кишечного тракта, аллергические реакции, астенизация и др.), что обуславливает необходимость одновременного скрининга на наличие указанных возбудителей и проведения дифференциальной диагностики. Симптоматика вяло протекающих паразитарных болезней неспецифична, что заставляет большинство пациентов обращаться к непрофильным специалистам: аллергологу, гастроэнтерологу и т.д., в зависимости от ведущих симптомов заболевания. Кроме того, указанные заболевания нередко протекают бессимптомно.

 

Lamblia Intestinalis Giardia – простейшие, паразитирующие в тонкой кишке и иногда в желчном пузыре простейшие, вызывающие развитие лямблиоза. Они могут существовать в вегетативной форме и в форме цист. Путь заражения – фекально-оральный, при употреблении зараженной цистами лямблий воды или пищи, а также через загрязненные цистами руки и бытовые предметы. Источник инфекции – больной лямблиозом или бессимптомный носитель. Инкубационный период составляет 3-42 дня. Лямблиоз может протекать бессимптомно с гибелью возбудителя через 1-3 месяца. При клинически выраженном лямблиозе, независимо от характера течения инфекции (острого или хронического), преобладают симптомы диареи: боли, вздутие и урчание в животе, повышенное газообразование, частый желтоватый водянистый стул с неприятным запахом. Характерна потеря аппетита, рвота и стеаторея – увеличение количества непереваренных жиров в кале из-за нарушения их всасывания. К внекишечным проявлениям лямблиоза относятся различные аллергодерматозы (неукротимый кожный зуд, крапивница, бронхиальная астма, эозинофильные легочные инфильтраты, блефариты), артрит и ринит. Чаще заболевают дети, особенно в возрасте от 1 года до 4 лет. У них инфекция протекает наиболее тяжело, может прекратиться нормальная прибавка массы тела.

Blastocystis hominis - простейшие паразиты, которые обитают в кишечнике организма, при определенных условиях могут вызвать кишечную инфекцию - бластоцистоз. Бластоцистоз не представляет угрозы для жизни человека, но при совпадении ряда факторов может вызывать различные симптомы (дискомфорт и боли в животе, неустойчивый стул, диарея, вздутие живота, тошнота, зуд в области ануса, снижение веса, высыпания на коже). Основные пути передачи: водный, пищевой, контактно-бытовой.

Dientamoeba fragilis (диентамеба фрагилис) - является простейшим паразитом, возбудителем диэнтамебиаза. Предполагается, что передача возбудителя происходит фекально-оральным путём через яйца гельминтов (аскарид, остриц и др.), так как паразит хрупкий и, вероятно, самостоятельно не может долго жить в окружающей среде (после выделения с фекалиями) или в желудочном соке (после проглатывания). Было выявлено, что инфекция D. fragilis часто наблюдается у больных энтеробиозом. Симптомы инфицирования Dientamoeba fragilis, в большинстве случаев, выражены незначительно, а у многих инфицированных и вовсе не проявляются. Отмечаются периодический понос, боль в животе, потеря аппетита, в некоторых случаях - потеря веса, тошнота и утомляемость. Диентамёбы ассоциируются с синдромом раздражённого кишечника.

Isospora belli - возбудитель изоспороза. Механизм заражения – фекально-оральный, реализуемый пищевым, водным и бытовым путями. Инкубационный период заболевания составляет около 6-7 дней. Попадая в желудочно-кишечный тракт, изоспоры проникают внутрь энтероцитов, в результате нарушается пристеночное пищеварение и всасывание питательных веществ. Организм хозяина начинает терять белки, жиры, витамин В12, развивается синдром мальабсорбции и клиническая картина энтероколита. Основным признаком данной нозологии является появление диареи. Стул становится жидким, кашицеобразным, иногда водянистым. Возможно наличие примесей в виде слизи, прожилок крови. У больных с сохраненным иммунитетом изоспороз протекает в легкой или среднетяжелой форме и излечивается самостоятельно спустя 10-18 дней. Было доказано, что некоторые из спорозиотов, вновь образованных в организме человека, способны перемещаться в лимфатические узлы и там переходить в состояние покоя. Такие формы существуют длительное время, а при развитии иммунодефицита, в частности – ВИЧ-инфекции, могут вновь активироваться, образуя трофозоиты и провоцируя реактивацию патологического процесса.

Cryptosporidium parvum - высоко инфекционный энтерический патоген. Криптоспоридиоз — заболевание человека, передающееся фекально-оральным путем. Инкубационный период криптоспоридоза приблизительно 1 неделя, а клиническое заболевание происходит у более 80% зараженных людей. Характерно начало резкое, с водянистой диареей, коликами в животе и, реже, тошнотой, анорексией, лихорадкой и недомоганием. Симптомы обычно сохраняются 2–3 недели, редко больше 1 месяца, а затем идут на спад. Фекальное выделение ооцисты может продолжаться в течение нескольких недель после того, как симптомы пошли на спад. Бессимптомное выделение ооцист распространено среди детей в странах с плохими санитарными условиями.

Entamoeba histolytica (дизентерийная амёба) - вид амёб, возбудителей амёбиаза (амёбной дизентерии, амёбного колита). Источником инфекции служит больной человек с хронической формой амебиаза в период ремиссии или цистоноситель за счет выделяющихся с фекалиями цист. Механизм заражения — фекально-оральный: через пищу, воду или контактным путем. Инкубационный период от 1 недели до нескольких месяцев с момента заражения. Амебиаз характеризуется язвенным поражением кишечника (кишечный амебиаз) и, в осложненных случаях – формированием абсцессов печени, мозга и др. органов (внекишечный амебиаз). Следует заметить, что случаи выздоровления от острого кишечного амебиаза без специфического антипаразитарного лечения встречаются редко. Поэтому речь идет не о выздоровлении, а о периоде ремиссии, когда симптомов нет, а амебы в организме есть. Ремиссия может продолжаться в течение нескольких месяцев, а затем болезнь снова обостряется и процесс принимает хроническую форму.

 

Быстрая и правильная диагностика гельминтозов чрезвычайно важна для выбора соответствующего метода лечения. Современные технологии лабораторной диагностики позволяют значительно ускорить процесс выявления паразитов. Традиционно, обнаружение кишечных паразитов проводилось путем микроскопического исследования образцов кала. Однако, в последние годы в лабораториях по всему миру все чаще для этих исследований выбирают именно метод ПЦР. Исследование кала методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) выявляет даже самые незначительные генетические следы присутствия гельминтов и простейших. Такие тест-системы обладают высокой специфичностью и чувствительностью при обнаружении возбудителей кишечных паразитозов в образцах кала.

Преимуществами «ПРОТО - СКРИН» и ПЦР-метода являются:

• ПЦР в реальном времени, обеспечивающая оперативность получения результатов.
• Точная идентификация.
• Молекулярно-биологическая технология, обеспечивающая высокую специфичность и чувствительность теста.
• Стандартизация исследования и минимальное влияние человеческого фактора.
• Возможность применения «ПРОТО-СКРИН» для скринингового обследования людей, имеющих неспецифические симптомы.

Наличие ДНК возбудителя в кале указывает на инвазию и позволяет подтвердить предполагаемый диагноз. Отрицательный результат исследования не всегда означает отсутствие протозойной инфекции. Он может быть связан с небольшим количеством простейших в исследуемом образце, а также с их жизненным циклом (в некоторые периоды цисты могут не выделяться с калом). Для уверенности в результате рекомендуется повторить анализ через 3-7 дней. Назначение на их основании какой-либо лекарственной терапии и принятие медицинского решения должно проводиться исключительно врачом.

ПОДГОТОВКА К ИССЛЕДОВАНИЮ

 Кал следует сдавать до начала приёма антибиотиков и химиотерапевтических препаратов (если это невозможно, то не ранее чем через 12 часов после отмены препарата). Не допустимо использование свечей. Перед исследованием необходимо исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонны, пилокарпина и др.) и на окраску кала (железа, висмута, сернокислого бария), в течение 72 часов до сдачи кала. Подготовительные правила сдачи кала: за 2-е суток до сбора материала откажитесь от помидоров, томатного сока, пасты, свеклы, черники, гранатов и других овощей и фруктов, содержащих в своем составе красящие вещества; за 3-е суток до сбора кала откажитесь от приема антибиотиков, препаратов, вызывающих изменение моторной функции кишечника, лекарств на основе энзимов, исключите прием слабительных, препаратов, не применяйте ректальные свечи, масла; в течение нескольких дней, предшествующих сдаче анализа, ограничьте в рационе разнообразные экзотические блюда. Питание должно состоять из овощей, фруктов, злаковых каш, кисломолочных продуктов. Количество пищи должно быть в нормальных пределах. Воздержитесь от жирных, копченых, острых и маринованных продуктов; если вы принимаете медикаменты с содержанием железа и висмута, то их необходимо отменить за 2 суток до сбора кала для исследования; после рентгенографии с контрастным веществом (барием), кал собирать не ранее, чем через 7–10 дней после исследования; женщинам не рекомендуется сдавать анализ во время месячных.

 

Материал для исследования: кал.

Сбор биоматериала:

Кал должен быть свежесобранным. Кал собирается в стерильный пластиковый контейнер из различных мест фекальной массы специальной ложечкой, вмонтированной в крышку контейнера, в количестве, равном объему чайной ложки. Стул должен быть самостоятельным (без применения клизм и слабительных) и собран с невпитывающих материалов, без примеси мочи.

 

ПОКАЗАНИЯ

При подозрении на паразитарное заболевание, общие симптомы интоксикации организма, диарея, при обследовании близкого окружения больного, после поездок в места высокого эпидемического риска.

 

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

 Интерпретация результатов содержит аналитическую информацию для лечащего врача. Лабораторные данные входят в комплекс всестороннего обследования пациента, проводимого врачом и не могут быть использованы для самодиагностики и самолечения.

 

«Обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК, специфичный для возбудителя.

«Не обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала не найдено фрагментов ДНК, специфичных для возбудителя, или концентрация ДНК возбудителя в образце ниже границы чувствительности метода.